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Biointron / ペプチド研究所 ID: J02009

VHH抗体開発保証サービス ID: J02009

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Biointronは、自社のアルパカ飼育基地を所有しており、科学的かつ厳格な方法でアルパカの利用と管理を行うことができます。VHH開発サービスによりユニークな配列の提供を保証します。

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サービスについて

概要

VHH抗体（VHH antibody）、または単一ドメイン抗体（Single domain antiobdy）としても知られ、そのサイズ、溶解性、固有の安定性、および多能構築体に容易に適合させる能力など、従来の抗体フォーマットとは異なる独自の特性を持っています。これらは、一般的でないまたは隠れたエピトープを認識し、酵素ターゲットの空洞や活性部位に効果的に結合する能力を持っています。

VHHは、アルパカ、ラマ、ラクダなどのラクダ科動物から発見された重鎖のみからなる抗体から派生した最小の抗原結合断片です。これは、彼らの小さなサイズと構造によるもので、これにより従来の抗体では難しいかもしれない組織に浸透し、特定のターゲットに高い親和性で結合する能力があります。

Biointronは、単一ドメイン抗体の発見分野でトップクラスの存在として確立されています。ファージディスプレイ技術を活用し、私たちの科学者チームはユーニックな単一ドメイン抗体の製造と開発に専念します。（fig.1）

fig.1 VHH antibody

特長

  • 自営のアルパカ飼育農場
    ・300+のアルパカが利用可能
    ・1つのプロジェクトに1匹のアルパカを専用
  • 1年間に100以上のプロジェクトを納品する実績がある
    ・様々な免疫化学、パニング、スクリーニング手法
    ・複数のアッセイ（ELISA、SPR、FACS、内在化、ADCCなど）が可能
  • 高い多様性とラージカパスィティ
    ・高い多様性とラージカパスィティを活かし、成功を最大化
    ・ライブラリのサイズは少なくとも109

アルパカVHH抗体のアフィニティ統計

VHH抗体の親和性が10-8から10-11Mの範囲で生成されていますが、ほとんどは10-8および10-9 Mの範囲にあります。提示されたデータは、1つのクライアントからのプロジェクトの一部を表しており、サンプリングバイアスがある可能性があります。異なるターゲット間の分散を反映していないかもしれない親和性の異なるヒットの分布です。データはSPR親和性測定から得られています。（fig.2）

fig.2 アルパカVHH抗体のアフィニティ統計

作業フローチャート（fig.3）


fig.3 作業フローチャート

サービス内容

ステップ 詳細 作業時間 納品物
① 抗原の準備 / 抗原の検証 ・Biointronは抗原を準備することもできるし、お客様からの提供も可能である。 抗原準備には2週間、検証には2〜3日 ・1mg精製されたタンパク質抗原
・抗原がお客様から提供される場合、SDS-PAGE>95%、エンドトキシン<1EU/mg 抗原>4mg
② アルパカの免疫化とPBMCの単離/保存 ・5mLの免疫前血清を回収します。
・2回目、3回目、および4回目の免疫後、血清のELISAテストを実施し、その結果を報告します。
・第2回、第3回、第4回の免疫後、50mLのPBMCを回収し、Trizolで保存します。		 8～10週間 ・アルパカが抗原によって死亡した場合、設定料が75万円かかります。
・決定ゲート：2回目、3回目、および4回目の免疫後のELISA滴定に基づいて、お客様はライブラリー生成に使用するPBMCを選択できます。
③ VHHファージライブラリの構築 ・RNA抽出とcDNA調製
・VHH増幅
・エレクトロポレーション用コンピテントセル
・ライブラリーの多様性とカパスィティの測定		 3～4週間 ・VHHカパスィティは108から109に達します。
④ ライブラリーバイオパニング及びスクリーニング ・少なくとも3回のパニング（液相または固相パニング）
・ELISA検証、ポジティブクローンスクリーニングの同定と評価
・ポジティブクローンのシーケンス解析とシーケンス結果の解析		 3～4週間 ・少なくとも20のユニークな配列を提供することを保証します。
VHH-Fc抗体の産生（オプション） ・遺伝子合成、サブクローニング、プラスミドの準備
・一過性発現と精製
・QC		 2週間 ・精製された抗体（SDS-PAGE >95%, endotoxin level <1EU/mg）
アフィニティランキング（オプション） Biacore 8Kにより、アフィニティを測定 0.5週間

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