概要
Gibco
™ AAV-MAX Helper Free AAV Production Systemを用いて、目的のアデノ随伴ウイルス(Adeno associated virus, AAV)を産生します。
実験用途に応じて、Thermo Scientific
™ POROS
™ CaptureSelect
™ AAVX Affinity Resinを用いたアフィニティ精製や各種分析も可能です。作業はすべて国内ラボで実施します。
特長
- Gibco AAV-MAX Helper Free AAV Production Systemを利用し、細胞を高密度で浮遊培養することで、高titerのAAV産生を実現します。
- Thermo Scientific POROS CaptureSelect AAVX Affinity Resinによる高純度の精製および濃縮が可能です。
- 複数のAAVセロタイプへの対応が可能です。
- 分析項目のオプションとして、Applied Biosystems™ TaqMan™ Real-Time PCR法によるtiter測定(VG:vector genomes)やSDS-PAGE分析による精製度評価も提供しています。
ウイルスに挿入したい遺伝子をお持ちでない場合は、人工遺伝子合成(Thermo Scientific
™ GeneArt
™))および、クローニングサービスをご利用いただくことが可能です。
国内ラボで試験を行いますので、迅速で丁寧な対応が可能です。お問い合わせから納品まで短期間でお届けすることができます。ぜひご相談ください。
試験フローチャート
AAV産生(納期4週間)
AAVパッケージング用のプラスミド3種類(Transfer Plasmid, Rep/Cap Plasmid, Helper Plasmid)をご提供いただき、プラスミド精製、AAV産生、クルードライセ―トの回収を行います。
-試験に必要な量のプラスミドをご提供いただける場合、納期2週間ほど短縮されます。
↓
オプション:産生したAAVの精製・濃縮(納期1週間~)
↓
オプション:分析(納期1週間~)
- TaqMan Real-Time PCRによるtiter測定(目的遺伝子特異的TaqManプローブキットをご提供いただく必要がありますがサーモフィッシャーサイエンティフィック社から候補配列のご提示も可能です)
- SDS-PAGE
125 mL シェーカーフラスコを用いて30 mLスケールで 6種類のセロタイプのAAV産生試験を行いました
。6種類のセロタイプすべてにおいて高Titerのウイルス産生がされていることがデータで示されました。
GFPを搭載するAAV1クルードライセ―トから、POROS CaptureSelect AAVX Affinity Resinによるアフィニティ精製、および限外ろ過濃縮を行いました。
得られた精製AAV溶液のSDS-PAGEおよび293 FT Cellへの感染試験を行った結果、AAVキャプシドタンパク質(VP1、VP2、VP3)が高純度で確認され(
fig.2)、高効率の遺伝子導入・発現が確認されました。(
fig.3)
ご提供いただくもの
- AAV発現用プラスミド3種類(Transfer Plasmid, Rep/Cap Plasmid, Helper Plasmid)
- 目的遺伝子特異的TaqManプローブキット(titer測定ご希望の場合)
- 配列情報、参考文献、参考資料など
スケールおよび価格は一例です。ご相談の上、お見積りさせていただきます。
また納期は必要量のプラスミドをご提供いただく場合、2週間短縮されます。
titer測定をご要望の場合は、TaqMan
™ Real-Time PCRによるtiter(VG/mL)測定(目的遺伝子特異的TaqManプローブキットをご提供いただく必要があります。候補配列のご提示が可能です。お見積もり時にご相談ください。)
30 mLスケール
作業内容 | ターゲット数 | 納期 |
1 | 2 | 3 | 4 | 8 |
価格(税抜)(ターゲットあたりの単価) |
AAV産生 | ¥210,000 | ¥140,000 | ¥120,000 | ¥105,000 | ¥95,000 | 4週間 |
AAV産生~精製・濃縮 | ¥345,000 | ¥250,000 | ¥220,000 | ¥195,000 | ¥175,000 | 5週間 |
AAV産生~精製・濃縮 titer測定 | ¥375,000 | ¥280,000 | ¥250,000 | ¥225,000 | ¥205,000 | 6週間 |
3mLスケール
作業内容 | ターゲット数 | 納期 |
4 | 8 |
価格(税抜)(ターゲットあたりの単価) |
AAV産生 | ¥75,000 | ¥60,000 | 4週間 |
AAV産生~精製・濃縮 | ¥125,000 | ¥100,000 | 5週間 |
AAV産生~精製・濃縮 titer測定 | ¥150,000 | ¥120,000 | 6週間 |
オプションサービス
作業内容 | 価格(税抜) | 納期 |
SDS-PAGE | ¥60,000 | 1種間 |