ジェンスクリプトジャパン / ジェンスクリプトジャパン ID: J01500

GenExactTM 1本鎖DNA合成サービス ID: J01500

効率的で正確なCRISPRノックインに最適なssDNA

サービスについて

概要

一本鎖DNA(ssDNAまたはssODN)は、高い編集効率かつオフターゲットを減少した、遺伝子ノックイン作製のための最良なCRISPR相同組換え修復(HDR)テンプレートとして、皆様にお使いいただいています。GenScriptは、お客様のCRISPR実験の編集効率を最大化するために、高品質で配列検証済のssDNAを提供しています。

なぜCRISPR遺伝子ノックインHDRテンプレートとしてssDNAを使用するのか?
  • 高い編集効率
  • 低い細胞毒性
  • オフターゲットが起こりにくい
  • 編集の正確性の向上
  • プライマリー細胞や幹細胞の編集に最適
  • トランスジェニック動物モデルの開発に最適

特長

  • 150-5,000 ntの長さで、ssDNAの完成品はサンガーシークエンシングにより配列検証済
  • 有害な化学物質を使わず、酵素的アプローチで、二本鎖DNA(dsDNA)が検出できないレベルで、DNAへの損傷を最小化
  • 最大100 mgの納品量で、フレキシブルな研究デザインを可能にする
  • 一度作成したテンプレートは弊社で保管し、再注文時の納期短縮や費用低減を実現
  • ssDNAテンプレートとしての合成が困難な遺伝子における専門知識と、16年以上の経験
  • cGMP レベルと GMP-like ssDNA 生産が対応可能

CRISPRを用いた相同組み換え修復でのゲノム編集

CRISPR/Cas9は、ターゲットDNA部位へ正確に二本鎖切断(DSBs)を行うため、広く普及しています。ガイドRNA(gRNA)はCas9タンパク質と複合体を形成した後、ターゲットDNA上のprotospacer adjacent motif(PAM)配列を認識します。
Cas9は、エンドヌクレアーゼ活性によりDSBsを引き起こし、その後2種類の修復機構を誘導します。一つは非相同末端結合(NHEJ: non-homologous end-joining)で、DSB部位に変異を導入します。もう一方のメカニズムは相同組換え修復(HDR: homology directed repair)で、切断部位にドナーDNAを挿入し、遺伝子ノックインを可能にします。従来、HDR用のドナーDNAテンプレートとして、二本鎖DNA(dsDNA)使用されてきましたが、最近の研究では、一本鎖DNA(ssDNAまたはssODN)がCRISPRベースの遺伝子挿入、置換及び修正で最適なHDRテンプレートであることが示されました1-5。

サービス内容

試験内容 試験方法 合格基準 リサーチグレード (≤2mg)
純度 アガロースゲル電気泳動 単一バンド
シークエンスの正確性 サンガーシークエンス 100%正確であること
吸光度 分光光度計 260 nm/230 nm ≥ 2.0
分光光度計 260 nm/280 nm 1.8~2.0
バイオバーデン TSAプレートでのインキュベーション コロニーが形成されないこと
エンドトキシン TALアッセイ < 10 EU/mg
残存タンパク質 Micro BCA Protein Assay Kit ≤50ug/mg
定量的純度 Agilent 2100 バイオアナライザー ≥90%
pH pHメーター、プローブ バッファーのpHによる
導電率 pH メーター、プローブ バッファーの導電率による

ご注文に関して

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製品カタログ・リーフレット

参考価格・納期

ssDNA
・最速3週間で納品
納品量 (ug) 200~500nt (円/製品) 501~5000nt (円/製品)
3 ¥64,000 ¥64,088~¥472,000
5 ¥80,000 ¥80,096~¥552,000
10 ¥104,000 ¥104,104~¥624,000
20 ¥120,000 ¥120,112~¥704,000
50 ¥192,000 ¥192,128~¥984,000
100 ¥240,000 ¥240,136~¥121,6000
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